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產品分類
Cassification
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詳細介紹
| 品牌 | Abnbio | 貨號 | ABG201-50 |
|---|---|---|---|
| 規格 | 50X100ul | 供貨周期 | 現貨 |
| 主要用途 | 感受態細胞 | 應用領域 | 環保,食品/農產品,化工,生物產業,制藥/生物制藥 |
基因型F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm(DE3)
簡要說明
BL21（DE3）感受態細胞用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區整合于BL21的染色體上，所以稱為BL21(DE3)。可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。BL21（DE3）感受態細胞由特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率達108cfu/μg。
操作說明
取100μl冰上融化的 BL21（DE3）感受態細胞，加入目的質粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。
42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養基，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。
4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。
5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。
注意事項
感受態細胞最好在冰上融化。
2.混入質粒時應輕柔操作。
3.轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。
4.誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。
5.為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。
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